具体方法:向改良后Starkey培养基中加入0.2%的刃天青溶液,培养基煮沸后,加入L-半光盐酸盐0.5g,通入高纯氮气驱氧30min,121℃灭菌20min,固体培养基加入16%的琼脂糖。
单独配 3%的FeSO4?(NH4)2 SO4 厌氧
SRB菌株于液体培养基中37℃培养48h 后, 在Olympus COVER-018光学显微镜下革兰氏染色观察。
2.DNB菌
方法同
SRB菌,PH值最好在7,
药品:
(NH4 ) 2SO4 3 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, M gSO4?7H2O 0.5g,
Ca (NO3 )2 0.01 g, FeSO4?7H2O 8.0 g, 蒸馏水1 000 mL
121℃灭菌15 m in。
恒温摇床培养箱振荡培养
由于此项操作开始时间较晚,至实习结束,菌落还未完成一个完整周期的培养。
三、水生细菌的计数
1.血球板计数法
取样:先清洗一个容量为100毫升的取样瓶或烧杯。取样前轻轻振荡试管搅拌,待分布均匀后,立即用注射器针管取样,取样的量为1毫升。加蒸馏水100倍稀释。
样品放于计数板:放置前必须将血球计数板和盖玻片清洗干净、擦干,不能有油污染和杂质。将血球计数板平放在桌子上,盖好盖玻片;然后把样品瓶轻轻摇动几下,菌分布均匀,并立即用干净的微吸管取样品,迅速把微细吸管放到盖玻片的边缘处,轻压微细吸管的橡皮帽,使样品流入计数板内。注意控制样品流入量,不能过多,过多则流入到沟内;也不能过少,过少则计数时不准确,应充满画线方格及其周边部分。还应注意盖玻片下不能有气泡存在,否则会造成计数不准确。样品吸入血球计数板后,稍停1分钟,待细菌沉降在玻片表面上再在显微镜下进行计数。
计数:计数中央大格的4个角的中格,每个中格有25个小格,逐一计数,4个中格相加共计数100个小格。计数时应从计数框一角开始,在计数框边缘的标本应按"计上不计下、计左不计右"的原则,计数出细菌的总量后,按下式计算出每毫升菌液中的细菌数量:细菌数量=100个小格的细菌数×4×10000×稀释倍数。
注意每个样品最少重复计数两次,然后取其平均值
#2 895=179(47,35,30,39,28)*5 1595=319(12,30,153,57,67)*5
(895+1595)/2*10000*100=1245*1000000
#8 815=163(50,50,20,32,11)*5 305=61(16,11,12,12,11)*5
(815+305)/2*10000*100=560*1000000
2.MPN法计数
1)称取样品1g,放入90ml无菌水中,振荡,让菌充分分散,然后按十倍稀释法将其制成10-1稀释液。
2)将26支装有培养液的试管按纵3横8的方阵排列于试管架上,第一纵列的3支试管上标以10-2,第二纵列的3支试管上标以10-3第八纵列的3支管上际以10-9,另外2支试管留作对照。
3) 用无菌注射器针管按无菌操作要求吸取10-1的土壤稀释液各lml放入编号10-2的3支试管中,再从10-2稀
释液各lml放入编号10-3的3支试管中,依次向后稀释。对照管不加稀释液。
4)将所有试管置28℃培养8天后观察结果。
对照相关的MPN计数表查寻
MPN计数结果
2.0*100000 cfu/ml
一点建议:
在用电极法测定出水各项指标的时候,曾出现硝酸根一直无法检测或是与预期浓度相差很多的情况,怀疑在进如反应器前某些微生物分解白糖时将硝酸钠作为氮源利用,受师兄的启发提出新增加一个泵将硝酸钠和其它进水成分分开泵入,之后的测验效果还不错
三个星期的实习生活让我能把学到的知识得以应用,并且学到了一些在校园内无法深刻领悟的东西一些感悟